在细胞培养过程中，适宜的培养条件至关重要。常用的培养基为1640，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（PS），可用于贴壁和悬浮细胞的培养，适宜温度为37℃。在传代方法上，建议初次传代比例如1:2，确保细胞的良好生长状态，每两天需要更换培养液。

在处理细胞时，首先应使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，确保在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存，以便后续参考。在前三天拍摄的照片是非常重要的，若无法提供照片，则默认接收到的细胞状态良好。

在细胞传代过程中，如果细胞未达到80%的融合度，需将培养液收集至离心管，保留5ml培养基在37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代。

贴壁细胞的传代步骤如下：首先弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次，然后添加0.25%的胰蛋白酶消化液，置于37℃的培养箱消化1-2分钟。观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速用5ml完全培养基终止消化。将细胞悬液转移至离心管中，离心5分钟，再用完全培养基重悬。最后，按1:2的比例分瓶传代，培养至5-8ml/瓶，在37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞的传代，建议采用半换液法和离心换液法。悬液处理后，将细胞收集到离心管中，离心后去除上清液并补加1-2ml的新培养液进行重悬，再按比例进行分瓶传代，以保持细胞生长活力。

在细胞冻存过程中，当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，使用PBS清洗细胞，添加胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后终止消化，将细胞悬液转移至离心管中进行离心。再用雅吉生物无血清冻存液进行重悬，最后将冻存细胞放入-80℃的冰箱保存，若需转入液氮罐中，则需在-80℃中存放24小时以上。

细胞复苏时，从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，擦拭冻存管外壁后，将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中进行离心、重悬，并接种至T25培养瓶中。在后续培养中，建议日常使用新鲜的完全培养基。俄罗斯专享会284致力于为广大科研工作者提供优质的细胞培养产品和服务，提高实验的成功率和效率。

在实际工作中，需特别注意细胞在运输过程中的贴壁情况，发生脱落的部分应及时处理并记录，以确保细胞传代的有效性。同时，定期检测细胞生长状态和培养基颜色变化，可以及时调整培养条件，保证细胞的健康生长。